产品规格参数
产品组成:
● 2 × FastTaq Premix (with dye)
● 预混液储存温度:-20°C(避免反复冻融)
| 货号 | 21411-01 | 21411-02 | 21411-03 |
| 包装规格 | 5 × 1 mL | 5 × 21411-01 | 10 × 21411-01 |
实验流程:
1. 反应体系配制:
| 组分 | 体积 |
| Template DNA | x μL |
| Primer 1 (10 μM) | 2 μL |
| Primer 2 (10 μM) | 2 μL |
| 2× FastTaq Premix(with dye) | 25 μL |
| ddH2O | 补足至 50 μL |
2. 推荐模板用量:
| 模板类型 | 推荐模板用量 |
| 菌体直接用DNA | 0.1~1 μg |
| 大肠杆菌提取DNA | 10~100 ng |
| 原核DNA | 0.1~10 ng |
| 真核DNA | 0.5~10 ng |
| cDNA | 1~5 μL(总体积的1/10以内) |
3. 反应程序:
| Stage | 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| Stage 1 | 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 cycle |
| Stage 2 | 变性 | 95℃ | 30 sec | 30-35 cycles |
| 退火 | 55-65℃ | 30 sec |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb 或 1 sec(适用于≤1.5 kb扩增) |
| Stage 3 | 充分延伸 | 72℃ | 5 min | 1 cycle |
4. 引物设计建议:
● 引物长度建议 15-30 个碱基,3’端建议为 G 或 C;
● 引物GC含量为40%-60%,Tm值55-65℃,上下游引物Tm值不宜相差过大(≤1℃);
● 避免引物内部及引物对之间存在连续同源序列、易形成二聚体等结构;
● 可以通过 blast/SnapGene 等工具检测特异性及二级结构。
5. 保存条件:
● -20°C 储存,≤ 0°C 运输;